使用液体菌种摇床有哪些细节

　　通过严格遵循上述操作规范，可显著提升菌体密度(典型可达OD600=8-12)、产物收率及设备使用寿命。实际操作中需结合具体菌株生理特性建立标准化流程，并做好运行日志记录以便追溯优化。

　　以下是液体菌种摇床的使用细节及关键要点说明：

　　一、前期准备与容器处理

　　1. 容器选择与灭菌

　　优先选用三角瓶(常用250-500mL)或挡板式发酵罐，依据培养体积按不超过容器容积70%的比例装液。玻璃器皿需经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，塑料瓶可采用环氧乙烷熏蒸灭菌，避免残留抑制剂影响菌体生长。

　　2. 培养基配制

　　按菌株特性配置适宜的培养基(如LB培养基用于大肠杆菌)，调节初始pH值(一般细菌pH6.8-7.2，真菌偏酸性)。若需富集特定代谢产物，可添加诱导物或前体物质。

　　二、接种与装载规范

　　1. 无菌操作

　　在生物安全柜内完成接种，火焰灼烧瓶口后拔除棉塞，接入适量菌种(接种量约5%-10%)，迅速封口并通过传递窗转入摇床。注意操作时长控制在酒精灯火焰有效范围内。

　　2. 对称平衡装载

　　将含菌液的容器对称放置于摇床上，确保负载均衡。偏心装载会导致电机异常振动，缩短机械寿命。大容量培养时建议使用配重块填补空位。

　　三、参数设置与监控

　　1. 温度控制

　　根据菌株最适生长温度设定(如霉菌30℃、嗜热菌55℃)，启动预热功能使腔体内温差≤±0.5℃。长时间运行时每4小时校验一次实际温度，避免温控失效导致菌体死亡。

　　2. 转速调节

　　兼顾溶氧效率与剪切力损伤：普通好氧菌设200-300rpm，丝状真菌可调至150rpm以下；厌氧培养需降低至80-120rpm并充氮置换气体。观察泡沫产生情况，必要时添加消泡剂。

　　3. 时间程序管理

　　采用分段控时策略：延迟期(0-6h)低速适应，对数期提升至目标转速，稳定期降速延长产酶/孢子形成阶段。设置提前15分钟减速程序，防止骤停引发涡流冲击。

　　四、运行过程管理

　　1. 状态巡查

　　每小时检查以下项目：① 固定装置是否松动；② 冷凝水排放口畅通性；③ 瓶内液面高度变化(判断蒸发速率)；④ 异常声响或异味出现。

　　2. 补料时机把控

　　采用间歇式流加策略，当DO电极显示溶解氧骤降时，通过无菌硅胶管补充碳源/氮源。补料体积单次不超过工作体积的10%，避免渗透压突变。

　　3. 污染防控

　　发现浑浊度异常升高立即终止培养，取样品镜检确认污染情况。严重污染时应先用消毒液擦拭摇床内壁，再用紫外线照射30分钟后方可继续使用。

　　五、收获与善后处理

　　1. 取样技巧

　　采用虹吸法或注射器侧向取样，避免扰动底部沉淀物。取样前后称重记录湿重变化，换算生物量积累曲线。

　　2. 废弃物处理

　　带压容器需先降压再开启，含有致病因子的培养物应经121℃灭活30分钟后排放。金属夹具用75%乙醇浸泡消毒，塑料部件更换专用垃圾袋密封丢弃。

　　3. 设备保养

　　每月清理风机滤网积尘，季度检修传动皮带松紧度。长期不用时排空水箱并涂抹硅脂防锈，数码显示屏加盖防护罩防尘。